Отбор образцов зерна и их предварительное исследование

Зерно для средней пробы отбирают порядком, предусмотренным ГОСТом 3040-55, а комбикорм — 8770-58. Рекомендуется брать для микробиологического анализа пробу не менее 1 кг и упаковывать ее в стерильный или чисто промытый в горячей воде мешочек.
Такие корма, как солома и сено, нужно брать из разных мест партии в количестве не менее 5 кг на каждые 25 т непрессованного и 50 т прессованного корма. Из взятой массы отбирают среднюю пробу весом в 1 кг, которую упаковывают в чистую (желательно стерильную) бумагу.
Для анализа муки навеску выделяют из среднего образца следующим образом. На чистую стеклянную пластину размером 20х20 см переносят ложкой из разных мест среднего образца около 50 г муки (отрубей). Взятые пробы смешивают, трехкратно выравнивая их в виде квадрата, затем ссыпают всю муку на средину так, чтобы образовался валик. После этого муку разравнивают и придавливают другим стеклом такого же размера. Образовавшийся слой должен быть не толще 3—4 мм. Верхнее стекло снимают и из возможно большего числа мест слоя муки отбирают маленьким совочком или шпателем ее порции в количестве, необходимом для исследования.
Для анализа головни следует особо взять 200 г муки, а для исследования муки на нахождение в ней спорыньи еще 400 г.
При предварительном исследовании поступившей в лабораторию пробы проводят: а) органолептический анализ; б) люминесцентный анализ; в) микроскопическое исследование; г) первичные прямые посевы образцов зерна и корма во влажные камеры, а если целесообразно на соответствующие среды.
В зависимости от ставящихся целей в дальнейшем может производиться или общий микробиологический анализ материала или только выделение чистых культур тех или иных микроорганизмов. Нередко производят также токсико-биологический анализ кормов и выделенных из них культур микроорганизмов.
Органолептическая оценка не всегда может вскрыть поражение микроорганизмами зерна и грубых кормов. Иногда даже массивное загрязнение зерна грибами не изменяет его цвета. Однако в тех случаях, когда зерно легковесное, морщинистое, щуплое, тусклое или побуревшее, это дает повод думать, что оно поражено грибами еще на корню. При сильном поражении зерна грибами рода Fusarium оно приобретает розовато-красный цвет; при поражении Aspergillus — зеленый и т. д. Пораженные плесенями зерно и другие материалы приобретают специфический запах.
Для определения общей поражениости зерна грибами с успехом может быть использована люминесцентная микроскопия в ультрафиолетовом свете. Для возбуждения люминесценции ультрафиолетовыми лучами существуют различные источники света, и наша промышленность выпускает специальные люминесцентные установки.
Доброкачественное зерно при облучении его ультрафиолетовыми лучами излучает ярко-сиреневый свет. Зерно, сильно зараженное грибами или с эпидермисом, пораженным ими, дает тускло-фиолетовое свечение различной интенсивности.
Зерно, у которого поражены все оболочки (мезокарпий, эндокарпий, алейроновый слой) не люминесцирует; это же зерно — размолотое, флюоресцирует ярко-сиреневым светом. Зерно, у которого гриб проник в мучнистое ядро (эндосперм), не люминисцирует совершенно.
He флюоресцирует совершенно или дает тусклое свечение зерно, подвергшееся физико-химическому воздействию. Отсутствие флюоресценции характерно также для муки, полученной из зерна, оболочки и эндоспермы которого были заражены грибами.
При микроскопическом предварительном анализе в каплю воды или физиологического раствора, которая находится на предметном стекле, соскабливают подозрительные очаги на зерне, стеблях и т. п. Препарат покрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом.
Можно микроскопировать смыв, полученный с зерна, стеблей, соломы. В таком случае материал измельчается и взбалтывается 20 минут с водой. При использовании шюттель-аппарата время взбалтывания можно сократить до 10 минут. Смыв центрифугируется, и полученный осадок подвергается микроскопированию. Некоторые грибы могут быть при этом определены но характерным особенностям их спор.
Прямые посевы зерна или корма для выделения грибов производят следующим образом. Целое зерну или кусочки корма помещают в чашки Петри на поверхность стерильной увлажненной фильтровальной бумаги, К части чашек целесообразно добавить среду Ван-Итенсона. Кусочки исследуемого материала не должны соприкасаться друг с другом. Засевают как можно больше материала, распределяя его в восьми-десяти чашках Петри.
В том случае, если требуется установить внутреннюю инфекцию зерна, его поверхность подвергают дезинфекции. Для этой цели может быть использован формалин в разведении 1:300 (экспозиция 1 час) или 70%-ный этиловый спирт (экспозиция до 6 минут). После дезинфекции зерно отмывают несколько раз стерильной водой и стерильным пинцетом раскладывают на поверхность фильтровальной бумаги или питательной среды.
При первичном изолировании грибов с зерна или муки можно смыв с зерна или суспензию муки высевать на твердые питательные среды (Чапека, картофельный агар и т. д.).
Сделанные посевы выдерживают в термостате при 22-25° ii периодически просматривают. При появлении роста грибов может быть установлена их родовая принадлежность. Особо заинтересовавшие исследователя культуры отсеваются для дальнейшего изучения и определения вида. Обычно мицелий гриба переносится с чашки Петри на питательную среду в пробирке при помощи загнутой платиновой иглы. Мицелий следует пересевать осторожно, так как он легко скручивается, ломается и может не дать роста на питательной среде. Споры грибов также могут быть перенесены при помощи платиновой иглы. При пересеве лучше использовать набор питательных сред, так как часто бывает трудно заранее определить, на каких субстратах лучше развивается тот или иной гриб.
Перед детальным исследованием выделенные культуры должны быть очищены при помощи методов, общепринятых в практике микробиологических лабораторий.
В тех случаях, когда ставится задача получить более полные представления о количественном и качественном составе микрофлоры зерна, используется метод посева на твердые питательные среды.