Пептидгидролазы

В зародыше зерна пшеницы обнаружено несколько пептидгидролаз. Одна из них оказалась устойчивой в кислой среде, что позволило отделить ее от другого компонента, быстро теряющего свою активность при этих условиях. Кислото- и температуроустойчивый фермент пшеницы не сорбируется на карбоксиметилцеллюлозе и гидролизует α-N-бензоил-l-аргининэтиловый эфир (БАЕЕ). Он отличается от пептидгидролазы А (ПГА), обнаруженной в ячмене. Гель-фильтрацией на Сефадекс Г-100 исходную вытяжку, несорбирующуюся на КМЦ, можно разделить на две фракции. Одна из них содержит в основном пептидгидролазу А (ПГП, № 26—35) и кислотоустойчивые фракции № 12—25. Пептидгидролаза А гидролизует как БАПА, так и БАЕЕ, тогда как кислотоустойчивая гидролаза действует почти исключительно на БАЕЕ. Эта гидролаза полностью расщепляет многие ди- и трипептиды (лейцин — глицил — глицин, глицил — глицил — глицин, фенил — лейцин и другие). Кислотный оптимум ее действия лежит около pH 7,0, она не гидролизует гемоглобин и казеин, т. е. представляет собой пептидгидролазу, обладающую слабой специфичностью.
В отличие от пептидгидролазы А (ПГА) она сохраняет полностью свою активность при нагреве до температуры 45°С; ионы металлов оказывают на нее стимулирующее действие.
Пептидгидролаза А в дальнейшем была более подробно изучена и обозначена как БАПА-наза в соответствии с ее способностью расщеплять этот полипептид. Путем последовательного осаждения 0,4—0,8М раствором сернокислого аммония, повторной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе и препаративного электрофореза были получены очищенные препараты фермента дают только один пик, так же как и при хорошем исходные вытяжки. Он экстрагируется из проросшего зерна пшеницы водой при pH 8,0 и имеет кислотный оптимум в пределах pH 8,6-9,0. Существенное значение имеет то обстоятельство, что БАПА-наза не обладает способностью расщеплять гемоглобин и азоказеин, т. е. она представляет собой собственно полипептидазу.
При гельфильтрации на Сефадекс Г-100 очищенные препараты фермента дают только один пик, так же как и при хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, что свидетельствует об отсутствии изоэнзимов БАПА-назы.
Методом гельфильтрации была определена молекулярная масса этого фермента, равная 59000. Воздействие N-этилмалеимида и р-гидроксихлормеркуробензоата значительно снижало его активность (на 68 и 56% соответственно), что указывает на определенную роль сульфгидрильных групп в БАПА-назе. Однако ни йодуксусная кислота, ни бромат калия, ни окисленный глютатион не оказывали никакого влияния на свойства фермента. Нейтральным по отношению к БАПА-назе оказался также диизопропилфлуорофосфат, который ингибирует трипсин (последний также обладает способностью гидролизовать БАПА, и в этом отношении сходен с БАПА-назой пшеницы и ячменя).