Проверка токсических свойств чистых культур грибов

11.07.2015

Проверка пищевых и кормовых микотоксикозов обычно сопровождается выделением культур их возбудителей. Исследованию прежде всего подвергаются источники, вызвавшие отравление. Нередко анализируются также соскобленные некротические участки слизистой оболочки кишечника павших животных.
Для выделения токсических грибов рекомендуется брать набор питательных сред и использовать при посеве ряд разведений из исследуемого материала. Посев обычно делают па среду Чапека, картофельный агар, сусло-агар. Могут быть использованы и другие питательные среды. Иногда бывает целесообразно выдержать анализируемый материал перед посевом несколько дней во влажной камере при 20—25° С. Это приводит к накоплению в нем специфической микрофлоры.
Следует помнить, что исследуемый материал всегда имеет довольно богатую микрофлору, представители которой могут подавить на питательных средах развитие грибов-токсинообразователей. Однако общая картина токсикоза обычно бывает в достаточной мере характерной и ориентирует исследователя на поиски определенных грибов, вырабатывающих токсины. Колонии таких грибов выискиваются на чашечках Петри после того, как на среде начинается рост грибов.
При выявлении грибов-токсинообразователей в исследуемом материале необходимо также использовать коллекцию культур, выделенную при первичных посевах материала на фильтровальную бумагу.
Более детально работа по проверке свойств токсических грибов описывается в специальных руководствах, к которым мы отсылаем читателей. Здесь же мы даем лишь общие указания по работе с данными микроорганизмами.
Ори изучении грибов рода Fusarium следует обращать внимание на морфологические особенности макроконидий, микроконидий, присутствие хламидоспор. Наиболее характерным признаком отдельных видов, в том числе токсических вариантов Fusarium, является морфология макроконидий, их величина и количество перегородок, а также свойства микроконидий.
В.И. Билай при изучении грибов рода Fusarium рекомендует пользоваться сусло-агаром и жидкой средой с целлюлозой (см. среду Билай). На сусло-агаре спороношение отмечается на 10—15-й день, а пигмент у колоний образуется на 7—10 день.
Для изучения спороношения следует использовать также картофельный агар с 2—5% декстрозы и кислый картофельный агар. Пигментообразование хорошо наблюдать па рисе, ломтиках картофеля и некоторых других средах.
Г.П. Кудинова указывает, что Fusarium sporotrichiella хорошо образует микро- и макроконидии на синтетических средах (типа Чапека) с аспарагином, а хламидоспоры — на синтетической среде, содержащей сернокислый аммоний в качестве источника азотного питания.
Следует иметь в виду весьма ценное указание Ю. И. Рубинштейна о том, что токсические штаммы Fusarium sporotrichiella люминисцируют оранжевым светом при использовании ртутно-кварцевой лампы. He токсичные штаммы при тех же условиях дают сиреневую люминесценцию или не светятся совершенно. Для успешного проведения этой пробы следует выращивать культуры гриба на среде Чапека, на картофеле или моркови. Другие среды не обеспечивают успешного проведения пробы.
Гриб Stachybotrys alternans при первичном анализе соломы (или другого корма) на фильтровальной бумаге, смоченной средой Ван-Итерсона, через три — пять дней при температуре 22—25° образует черный налет. Черный цвет имеют споры гриба. Черно-сажистый налет спор Stachybotrys alternans иногда можно обнаружить па самом материале, присланном на исследование. Это относится к случаям сильного заражения хранящегося корма.
Если исследуемый материал был слабо поражен Stachy-botrys alternans, то образование темного налета задерживается и он может быть отмечен лишь на пятый — седьмой день.
Пересев спор гриба можно произвести на агар Чапека; на этой же среде можно произвести и очистку его культур.
Для обнаружения токсического вещества в культурах Stachybotris alternans может быть применена реакция, предложенная Кульбергом. Сущность этой реакции состоит в том, что токсические вещества гриба Stachybotrys в присутствии крепкой соляной кислоты с резорцином окрашиваются в розовый цвет. Используя эту реакцию Н.М. Пидопличко обнаружил токсин в стеригмах и конидиях гриба. В меньшем количестве он был найден в конидиеносцах. Нетоксические варианты гриба этой реакции не дают. Имеются указания, что у них обычно конидии более длинные, чем у токсических штаммов.
При выделении из корма гриба Dendrodochium toxicum, который нередко развивается внутри стеблей растений поступают следующим образом. Стебли разрезаются или расщепляются и изолированно раскладываются на увлажненную стерильную фильтровальную бумагу в чашки Петри. При температуре 22—25° через некоторое время на поверхности посеянного материала появляется мицелий гриба, а затем спородохии (подушечки из переплетений гиф, покрытые короткими конидиеносцами) округлой или овальной формы, разбросанные по поверхности разреза стебля. Мицелий переносится в пробирки со средой Чапека или на сусло-агар.
Грибы рода Aspergillus легко выделяют либо из первичных посевов материала на фильтровальную бумагу, либо при последующих рассевах на твердые питательные среды. Их родовая, а нередко и видовая принадлежность может быть установлена при микроскопировании. Обычно, однако, это удается сделать лить после тщательного изучения культур. Большинство видов рода Aspergillus предпочитают для своего развития несколько повышенные температуры. Наиболее теплолюбивым является Asp. fumigatus, оптимальная температура развития которого около 37° С.