Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

08.07.2015

Метод применяют для выявления внешней и внутренней зараженности семян болезнями. Он основан на стимуляции развития и роста микроорганизмов в зараженных семенах.
Зараженность семян определяют при проращивании их во влажной камере, на питательных средах, песке или в рулонах фильтровальной бумаги.

Анализ семян во влажной камере

При проращивании семян во влажной камере заболевания, вызываемые бактериями, выявляют по размягчению и ослизнению тканей семени. Заболевания, вызываемые грибами на проросших и не проросших семенах, проявляются в виде пятен различной формы и окраски, налета грибницы, пикнид, уродливости, деформации или отмирания частей проростков. Для контроля правильности идентификации патогенов применяют микроскопирование.
Из средней пробы, предназначенной для анализа семян на зараженность болезнями, выделяют навеску. Из семян основной культуры отбирают четыре рабочие пробы по 50 или 100 семян в зависимости от вида анализируемых культур.
Для проращивания семян во влажной камере применяют стерильные сухие чашки Петри, Коха или стеклянные стаканы, накрытые стеклом. На дно чашек (стаканов) помещают марлю в три слоя или фильтровальную бумагу в два слоя, или фильтровальную бумагу, положенную на гигроскопическую вату, толщиной слоя не более 0,25 см.
Марлю, комбинированный субстрат или фильтровальную бумагу в чашках Петри или Коха увлажняют с помощью пипетки, слегка приоткрывая при этом с одного края крышку чашки. Увлажнение считают нормальным, если при наклоне чашки с марлевых кружочков или фильтровальной бумаги стекает несколько капель воды.
Семена раскладывают на ложе с помощью пинцета на расстоянии 1-2 см друг от друга в зависимости от их крупности
Закрытые чашки Петри, Коха или стаканы с заложенными в них семенами помещают в термостат для проращивания.
Термостаты предварительно тщательно моют горячей водой с моющими средствами и дезинфицируют 1 %-ным раствором марганцовокислого калия через каждые 10 дней. Перед каждым фитоанализом их дезинфицируют спиртом или бактерицидной лампой в течение 30 мин. Один раз в месяц термостаты дезинфицируют с помощью бактерицидных ламп в течение 8 ч. Чашки Петри, марля, фильтровальная бумага, вата, пипетки, применяемые для анализа, должны быть стерильными. Стекло, на котором выделяют навески и отсчитывают семена, совки, чашки весов, растильни и другие предметы дезинфицируют спиртом. Чашки Петри и Коха с марлевыми кружочками, ватой или фильтровальной бумагой, а также пипетки заворачивают в оберточную бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 130° С в течение 1 ч (при немедленном использовании их стерилизуют без завертывания в бумагу) или в автоклаве под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 40-50 мин. Металлические предметы (пинцеты, препаровальные иглы и другое оборудование) стерилизуют над пламенем спиртовой или газовой горелки в процессе работы. Воду стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин под давлением 0,09807 МПа (1 атм). Допускается применять свежекипяченую воду. Воду кипятят в химических колбах, закрытых ватными пробками, в течение 30 мин, считая с момента закипания.
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

Просмотр семян пшеницы, ржи, ячменя, кукурузы, льна, сои, эфиромасличных культур, подсолнечника, гороха, овощной фасоли, моркови проводят в сроки, установленные настоящим стандартом; просмотр семян остальных культур проводят в сроки, установленные для определения всхожести по ГОСТ 12038 - 84, ГОСТ 30556 - 98. Виды болезней семян, выявляемые при проращивании во влажной камере, указаны в таблице 16.
Спороношение видов болезней семян, выявляемых при проращивании во влажной камере, показано на рисунках 16...22.
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

Для стимуляции образования конидиеносцев и конидий с целью идентификации патогенов некоторых грибов, например, полосатая пятнистость, сетчатая пятнистость, снежная плесень и др., необходимо 12 ч чередование света и темноты при проращивании семян в чашках Петри, Коха или стекляных стаканах с фильтровальной бумагой (освещенность 750-1250 люкс).
Анализ семян на питательных средах

Из средней пробы, предназначенной для определения зараженности, выделяют навеску семян основной культуры, из которой отбирают четыре рабочие пробы по 50 семян в каждой и помещают их в стерильную посуду с питательной средой
Приготовление картофельного агара

200 г вымытого, очищенного, нарезанного ломтиками картофеля заливают 1000 см3 воды и кипятят в течение 40 мин, затем жидкость фильтруют. В отфильтрованную жидкость доливают воду до 1000 см3, добавляют 20 г агара и подогревают до его полного растворения После растворения агара раствор фильтруют в горячем состоянии через несколько слоев марли с ватной прокладкой и стерилизуют под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин или текучим паром два раза по 1 ч через сутки. После стерилизации в питательную среду добавляют стерильный 50 %-ный раствор лимонной кислоты из расчета 0,1-0,05 см3 (одна капля) на 10 см3 или концентрированную молочную кислоту (4 см3 кислоты на 1000 см3 среды) и жидкость разливают по чашкам Петри.
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

Приготовление картофельно-глюкозного агара:
На 1 дм3 приготовленного картофельного агара перед стерилизацией добавляют 20-30 г глюкозы, а после стерилизации лимонную или молочную кислоту.
Приготовление среды из сухого агара Чапека

На 1 дм3 берут 45-50 г сухого агара Чапека и стерилизуют под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин.
Стерилизацию питательных сред проводят в автоклаве под давлением, без давления (текучим паром) или в кипятильнике.
Питательные среды без глюкозы стерилизуют под давлением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин, питательные среды с глюкозой стерилизуют под давлением 0,04904 МПа (0,5 атм) в течение 25 мин.
Стерилизацию питательных сред текучим паром проводят в два приема по 1 ч через сутки. В перерыве между первым и вторым приемами стерилизуемые жидкости держат при температуре 25-30 °С.
В стерильные чашки Петри диаметром 9,5-10 см наливают 10 см3 простерилизованного агара. Толщина слоя среды в чашке Петри должна быть 3-4 мм Разливку питательных сред в чашки и закладку семян проводят в бактериологической камере (стерильном боксе). Раскладку семян проводят на застывшую питательную среду пинцетом, периодически стерилизуя его обжиганием на спиртовке.
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

Семена промывают струей воды под водопроводным краном в течение 1-2 ч и дезинфицируют 1 %-ным раствором марганцовокислого калия или 0,1 %-ным раствором азотнокислого серебра, или 96 %-ным спиртом в течение 1-2 мин. Затем семена промывают в стерильной или прокипяченной воде и просушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги. Семена помещают в чашки Петри по 10-25 шт. в зависимости от культуры и ставят их для проращивания в термостат при температуре 22-25 °С. Проращивание семян проводят в течение срока, указанного для определения всхожести семян по ГОСТ 12038-84. Для контроля правильности определения болезней при просмотре семян небольшую часть развившейся колонии исследуют в капле воды под микроскопом.
Анализ семян в рулонах фильтровальной бумаги

Для проращивания семян используют два слоя увлажненной до полной влагоемкости фильтровальной бумаги.
Если анализируют четыре рабочих гробы по 100 семян, то размер полосок фильтровальной бумаги для каждой гробы должен быть 10x110 см (±2 см), если анализируют четыре рабочих гробы по 50 семян, то 10x55 см (±2 см).
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

Семена раскладывают в одну линию с интервалом 1 (2) см и на расстоянии 2-3 см от верхнего и боковых краев бумаги зародышами вниз. (Округлые семена без ориентации зародыша).
Разложенные на бумаге семена накрывают такой же полоской увлажненной фильтровальной бумаги, поверх которой накладывают коррекс или полоску полиэтилена, и сворачивают в рулон Рулоны ставят вертикально в сосуды и помещают в термостат при температуре 22-25 °С.
При проращивании семян не допускать подсыхания рулонов. Воду в поддоне термостата менять каждые 3-5 суток
Просмотр семян проводят в сроки определения всхожести семян по ГОСТ 12038 - 84, ГОСТ 30556 - 98.
Анализ семян пшеницы и ржи

Для анализа берут четыре рабочие пробы по 100 семян, не дезинфицируя их. Зараженность семян пшеницы и ржи фузариозом, темно-бурым гельминтоспориозом, альтернариозом определяют, проращивая семена в рулонах из фильтровальной бумаги или на питательных средах.
Признаки фузариоза (Fusarium sp)

При проращивании семян в рулонах развивается очень тонкий, нежный, пушистый быстро разрастающийся мицелий вначале снежно-белого или яркомалинового с прожилками цвета. Нередко семена окрашиваются в розовый или малиновый цвет и на них проявляются коростинки из спороношения гриба. Грибы этого рода характеризуются образованием микроконидий и макроконидий. Микроконидии одноклеточные, реже с 1-2 перегородками, овальные, яйцевидные. Макроконидии с 3-9 перегородками, разной формы, кривизны, изогнутости и размеров (рисунок 16).
Признаки темно-бурого гельминтоспориоза (корневая гниль), (Bipotaris Sorokiniana, Helmintosporium sativum Paml. King, et Bakke).

Для зараженных семян характерна бурая пигментация различных оттенков, вплоть до коричневого цвета. Семена покрываются густым черным налетом, состоящим из спороношения гриба. Конидиеносцы одиночные или в пучках по 2-3, бурые, длиной 110-150 мкм и шириной 6-8 мкм, обычно с 5-6 перегородками. Конидии веретенообразные, слегка изогнутые, темно-оливковые с 3-10 перегородками, на концах закругленные, длиной 60-120 мкм и шириной 15-20 мкм (рисунок 18).
Признаки альтернариоза (Altemaria sp).

На семенах образуется паутинистый мицелий, придающий семенам темно-серый цвет. Часто на зародышевой части развивается темно-оливковый налет, состоящий из конидиеносцев и конидий. Конидии оливковые или черно-бурые, обратно-булавовидные, в цепочках, с 3-6 поперечными перегородками и с одной или несколькими продольными перегородками, длиной 30-50 мкм и шириной 14-18 мкм, неодинаковой формы, чаще цилиндрические или овальные (рисунок 17).
Признаки септориоза (Septoriasp)

Зараженность семян пшеницы и ржи септориозом определяют, проращивая семена во влажной камере, в песке без дезинфекции или на питательных средах.
Проращивание семян во влажной камере. Семена раскладывают в чашки Петри без дезинфекции. Инкубация идет 14 суток при 10 °C в темноте. Признаки инфекции: отдельные коричневые пятна на колеоптиле, колеоптиле при этом часто укорачиваются; на ростках появляются мелкие черные бугорки Иногда отмечается скручивание проростков.
Проращивание семян во влажном песке. Подготовку песка к анализу проводят по ГОСТ 12038-84. Семена раскладывают в песок на глубину 2-3 см без дезинфекции. Инкубация идет 14 суток при 14 °С. Признаки инфекции: отдельные коричневые пятна на колеоптиле, при этом проростки могут быть искривленными. Иногда на оболочке семян образуются пикниды.
Проращивание семян на питательной среде. Семена дезинфицируют. Для проращивания используют картофельно-декстрозный агар, содержащий 500 мг стрептомицина на 1 дм3 воды. Картофельно-декстрозный агар готовят так же как картофельно-глюкозный, только вместо глюкозы берут 15 г декстрозы на 1 дм3 расплавленного картофельного агара. Инкубация идет 7 суток при 20 °C в темноте. Колонии гриба правильно-концентрические, порывающие семена, медленно растущие, мицелий тонкий, белый, кремовый, воздушный. Обратная сторона колоний желтого (коричневого) цвета, темнеющего со временем.
Анализ семян ячменя и овса

Анализ проводят путем проращивания семян во влажной камере на свету и в темноте, где определяют зараженность семян ячменя полосатой и сетчатой пятнистостью, овса - красно-бурой пятнистостью.
Зараженность семян ячменя и овса темно-бурым гельминтоспориозом (Bipolaris sorokiniana) определяют, проращивая семена в рулонах из фильтровальной бумаги. Для анализа используют четыре рабочие гробы по 50 семян без дезинфекции.
Семена предварительно замачивают в воде комнатной температуры в течение 3 ч и раскладывают бороздкой кверху на стекло или керамические плитки, обернутые фильтровальной бумагой. Стекло или плитки помещают в растильни и наливают воду, следя за тем, чтобы вода не смыла семена (можно использовать обычные строительные керамические плитки без ячеек). Во время инкубации воду подливают, не допуская подсыхания бумаги и семян. Инкубацию проводят в течение первых 2 суток при освещении лампами дневного света ЛД-40 или ЛБ-40 при температуре 22-25 °С.
Возбудители полосатой пятнистости ячменя и красно-бурой пятностости овса образуют спороношение только при инкубации семян в открытых растильнях (не накрытых стеклом).
Для идентификации возбудителей сетчатой пятнистости две растильни с семенами каждой гробы ячменя закрывают стеклом, две оставляют открытыми. Возбудитель сетчатой пятнистости образует спороношение в том и другом случае.
Последующую инкубацию (в течение суток) проводят в темноте, в закрытых растильнях при температуре 12-16 °С (в холодильнике). В этих условиях хорошо фopмиpyется конидиальное спороношение патогенов.
Просмотр семян проводят на 4-е сутки со дня закладки во влажную камеру. Зараженные семена просматривают под микроскопом типа МБС при 24-кратном увеличении Семена вместе со стеклом (плиткой) переносят под микроскоп. Около зараженных семян делают отметку на бумаге цветным карандашом или фломастером, а затем подсчитывают число отметок Одновременно подсчитывают число семян, пораженных темно-бурым гельминтоспориозом, который также может проявиться при анализе этим методом.
Признаки возбудителя полосатой пятнистости (Drechslera graminea Ito).

Гриб образует спороношение на зерновках во влажной камере на свету (солнечный свет или лампы дневного освещения). Стекло задерживает часть спектра, стимулирующего образование спороношения.
Конидиеносцы с конидиями образуются преимущественно на нижней цветковой чешуе, с зародышевого конца (иногда по гифам переходят на бумагу) и легко обнаруживаются под бинокулярной лупой или микроскопом.
Конидиеносцы одиночные, слегка изогнутые или прямые, у основания светлые, расширенные, длиной 150-350 мкм и шириной 15-25 мкм (чаще 210-270 и 18 мкм), количество перегородок 3-8 (чаще 4-6). На конидиеносцах могут образовываться цепочки конидий
Конидии почти цилиндрические, иногда несколько расширенные у основания, вначале почти бесцветные, при созревании светло-оливковые или желто-бурые, сильно варьируют по длине 60-70 мкм и ширине 15-35 мкм и количеству перегородок - от 0 до 6, чаще 3 (рисунок 18).
Признаки возбудителя сетчатой пятнистости (Drechstera teres Ito).

На зерновках спороношение внешне мало отличается от спороношения возбудителя полосатой пятнистости, но образуется оно на свету под стеклом почти так же хорошо, как и без стекла.
Конидиеносцы на зерновках чаще одиночные длиной 88-189 мкм и шириной 8-10,5 мкм с 4-9 перегородками Конидии цилиндрические, количество перегородок от 2 до 8. Вначале они бесцветные, в зрелом состоянии зеленовато-бурые или желтоватые длиной 46-134 мкм и шириной 12,6-21 мкм (рисунок 18).
Признаки красно-бурой пятнистости (Drechslera avenae Ito).

Спороношение гриба обнаруживается на 4-е сутки инкубации под бинокулярным микроскопом Конидиеносцы зеленовато-оливковые, с многочисленными перегородками. Длина их 200-400 мкм, ширина - 8-9 мкм. Конидии зеленовато-оливковые с 2-7 перегородками, длиной 55-151 мкм и шириной 13-18 мкм.
Анализ развития болезней проростков зерновых культур

Анализ проводят с целью выявления болезней колоса и корневых гнилей по баллам поражения.
Из семян основной культуры отбирают четыре рабочие гробы по 50 семян В каждой из четырех рабочих проб подсчитывают количество проростков семян и относят их к следующим баллам заражения:
0 - семена нормально и ненормально проросли, болезни на семенах и проростках отсутствуют;
1 - семена нормально и ненормально проросли, имеются слабые налеты грибницы и спороношения гриба, корешки и росток без изменения окраски, без пятен и бурых штрихов или они вьражены очень слабо;
2 - семена нормально и ненормально проросли, помимо налетов грибницы или без них отмечается побурение в виде штрихов или пятен на корешках или ростке;
3 - проростки с дефектами, корешки и росток отстают в росте, сильный налет грибницы, спороношение грибов, сильное побурение корешков, ростка и колеоптиля, местами ткань загнивает;
4 - загнившие семена, ненормально проросшие семена, росток и корешки которых загнивают и погибают от грибов и бактерий. Показатель развития болезни проростков семян (R) вычисляют по формуле:
R = (Σa x b) х 100 : N x К,

где а - среднеарифметическое значение количества пораженных семян по каждому баллу; b - соответствующий балл заражения; N - количество семян в одной рабочей гробе; К - высший балл учетной шкалы (К = 4).
Анализ семян кукурузы

Зараженность семян кукурузы красной гнилью, бактериозом, белью и нигроспорозом вьтявляют внешним осмотром семян, при необходимости микроскопируя грибницу.
Для этого навеску семян массой 200 г, предназначенную для анализа на зараженность, просматривают и выделяют семена с явными признаками зараженности болезнями.
Признаки красной гнили (Fusarium graminearum Snw).

Семя целиком или частично красно-коричневое, хрупкое, часто с пустотами, заполненными сплетением грибницы На поверхности его яркорозовый грибной налет.
Макроконидии гриба веретеновидно-серповидные, слегка изогнутые, в массе беловато-розовые, охряно-розовые, золотисто-желтые, с 3-5 иногда и больше перегородками. Микроконидии обычно отсутствуют (рисунок 16).
Признаки бактериоза (Bacillus mesenterucus-vulgatus Flugge).

На верхней части семян одно или несколько вдавленных пятен бледносерого цвета, диаметром 2-3 мм. Пятна ограничены узкой темно-серой каймой, хорошо обозначенной у белых зерен и слабовыраженной у желтых При сильном развитии болезни пятна становятся морщинистыми сплошь покрывают зерновку.
Признаки бели (непаразитарное заболевание).

На семенах глубокие, сильно развороченные трещины с выступающим из них эндоспермом мучнисто-белого цвета. Реже треснувшей оказывается только семенная оболочка и из нее выступает эндосперм.
Как вторичное явление на трещине может развиваться налет фузариума или другого гриба.
Признаки нигроспороза (Nigrospom orizae Pech.).

Пораженные семена тусклого цвета, слегка сероватые, сморщенные, недоразвитые. У основания, в местах прикрепления семени к початку (со стороны зародыша), видны черные кучки спор гриба, заметные простым глазом. Под микроскопом споры округлые, почти шаровидные, в незрелом состоянии полупрозрачные, в зрелом - черные, непрозрачные.
Зараженность семян диплодиозом, фузариозом, серой гнилью выявляют, проращивая семена во влажной камере.
Для этого из навески семян, после выделения семян с явными признаками зараженности, отсчитывают четыре рабочие пробы по 50 семян в каждой. Отсчитанные семена взвешивают и проращивают при температуре 25-30 °С. В каждую чашку Петри, Коха помещают по 10 семян.
Для выявления фузарноз а и серой гнили семена проращивают в течение 7 сут. для выявления диплодиоза - в течение 10 сут.
Семена перед закладкой на проращивание не дезинфицируют.
Признаки диплодиоза (сухой гнили) (Diplodia zeae (Snw.) Lev.).

На зараженных семенах белый, пушистый налет грибницы В дальнейшем на семенах (реже на проростках) мелкие, заметные невооруженным глазом черные точки — округлые пикниды (спороношение гриба). Образующиеся в пикнидах споры продолговатые, двуклеточные. Проростки зараженных семян загнивают.
Признаки фузариоза (Fusarium moniliforme Sheld.).

На семенах грибной налет белого или бледно-розового цвета. Сильно зараженные сухие семена легко ломаются и крошатся, на изломе они грязнобелого цвета.
Микроконидии мелкие, бесцветные. Макроконидии отсутствуют или имеются в небольшом количестве, бесцветные, слабо серповидные, с 3-5 перегородками (рисунок 16).
Признаки серой гнили (Rhizopus maydis Butd.).

На семенах густой плотный налет грибницы серого цвета, иногда пленкообразный. Сильно пораженные семена бурые, легко крошатся. Мицелий с одиночными или групповыми спорангиями с хорошо выраженными столонами и ризоидами. Споры гладкие, эллиптические, желто-бурого цвета.
Подсчитывают количество пораженных семян, выявленных при внешнем осмотре, и пересчитывают их содержимое в штуках на килограмм семян По истечении срока проращивания подсчитывают зараженные семена, выявленные во влажной камере, н также пересчитывают их содержание в штуках на килограмм семян. Результаты вычисления зараженности семян по внешним признакам и во влажной камере суммируют.
Анализ семян гороха

(Ascochyta pisi Lib.; Ascochyta pinodes (Berk. Et Bf.) L.K. Jones; Fusarium sp.; Altemaria sp.; Xanthomonas sp.)(puсyнoк 19).
Определяют зараженность семян гороха аскохитозом, фузариозом, альтернариозом, бактериозом, проращивая их на гофрированной фильтровальной бумаге.
Из семян основной культуры отбирают четыре рабочие гробы по 50 семян.
Фильтровальную бумагу режут на полоски шириной 120 мм и длиной 1000—1050 мм. Полоски бумаги, сложенные по две, гофрируют, то есть складывают гармошкой с высотой одного зубца (20±1) мм.
Таких зубцов на полоске длиной 1000 мм должно получиться (25+2) шт.
Гофрированную бумагу обмакивают в свежекипяченую воду, дают воде стечь и укладывают в растильню.
Проводят предварительную поверхностную дезинфекцию семян 0,5 %-ным марганцовокислым калием в течение 5 мин, затем промывают стерильной водой и раскладывают в гофрированную бумагу. В каждую складку помещают по два семени. Растильни с семенами ставят в термостат при температуре 22-25 °С. На шестые сутки проводят просмотр семян Признаки бактериоза: на семенах появляется эксудат желтого цвета. Признаки альтернариоза: на семенах образуется бархатистый войлок темно-серого цвета, состоящий из конидий гриба. На семенах, пораженных аскохитозом, образуется белый пушистый мицелий, иногда наблюдается загнивание ростка, при сильном поражении семена не прорастают. Семена, пораженные фузариозом, покрыты хорошо развитым пушистым белым или розово-белым мицелием, с тонкими серповидно-удлиненными конидиями.
Для уточнения вида гриба проводят микроскопирование.
Просмотр (не открывая чашки) проводят по колониям на 5-7-е сутки.
Признаки заболевания Мицелий гриба обычно развивается на 5-е сутки после раскладки семян в чашки Петри. Он вначале ярко-белый, затем постепенно утрачивает яркость и со временем (примерно на 10-15-е сутки со дня посева) становится грязно-кремово-желтым, уплотненным.
Чашки, в которых (на 5-7-е сутки) обнаружен мицелий, нужно выставить на свет при комнатной температуре (около 20 °С). На свету на 10-14-е сутки со дня высева на мицелии образуются пикниды гриба в виде мелких черных точек. Иногда пикниды лучше просматриваются со дна чашки. Для установления точного диагноза пикниды просматривают под микроскопом при малом увеличении. Под микроскопом будет видна темная пикнида с массой выходящих из нее мелких спор.
Биологический метод выявления зараженности семян болезнями

Анализ семян подсолнечника

Зараженность семян белой и серой гнилью определяют при проращивании их в рулонах фильтровальной бумаги, помещенных в стеклянные сосуды
Из семян основной культуры отбирают четыре рабочие гробы по 50 семян.
Перед закладкой в рулоны семена промывают под струей воды в течение 20—30 мин, затем дезинфицируют 1 %-ным раствором марганцовокислого калия в течение 10—15 мин. После дезинфекции семена тщательно промывают стерилизованной или свежекипяченой водой.
Для проращивания используют полоски фильтровальной бумаги размером 73x20 см, смоченные стерильной водой до полной влагоемкости (избытку воды дают стечь). Семена каждой пробы раскладывают острым концом книзу на полоску бумаги, отступая от верхнего края на 2 см Затем ее накрывают второй смоченной полоской фильтровальной бумаги, коррексом и сворачивают в рулон. Рулон помещают в стеклянный сосуд. Для поддержания рулонов во влажном состоянии сосуд закрывают сверху стеклянной пластинкой, оставляя зазор для доступа воздуха. Сосуды с рулонами помещают в термостат при температуре 22-23 °С.
Просмотр семян проводят на 10-е сутки. При необходимости просмотр повторяют на 14-е сутки.
Для контроля правильности определения возбудителя серой гнили небольшую часть развившейся колонии со спороношением исследуют в капле воды под микроскопом (рисунок 22).
Признаки белой гнили (Sclerotinla sclerotiorum).

Заболевание проявляется в виде белой плотной грибницы. На семядолях в области главного корня и подсемядольного колена появляются светло-коричневые размытые пятна, которые порываются белым пушком грибницы В дальнейшем образуются черные склероции различной величины и конфигурации, белые на изломе.
Признаки серой гнили (Botrytis cinerea Pers.).

На семядолях заболевание проявляется в области корня и подсемядольного колена в виде размытых пятен коричневого цвета с буроватым оттенком, которые порываются пепельно-серым пушистым мицелием Мицелий с одиночными прямостоящими древовидно-разветвленными оливко-бурыми конидиеносцами, отчетливо видными через лупу. Конидии яйцевидные или округлые, светло-дымчатые Длиной 8-15 мкм и шириной 6-10 мкм (в среднем 10 и 8 мкм). Склероции образуются редко.